間充質(zhì)干細胞可以從多種組織中分離出來，不同組織來源的間充質(zhì)干細胞在分離方法上存在一定的差異。以下是對不同組織來源間充質(zhì)干細胞分離方法差異的詳細介紹：

一、人臍帶間充質(zhì)干細胞

傳統(tǒng)分離方法與新方法對比：目前利用傳統(tǒng)分離提取細胞的方法所獲取的人臍帶來源的間充質(zhì)干細胞與臍帶組織中所含人臍帶來源的間充質(zhì)干細胞的理論值相差甚遠，造成臍帶組織的極大浪費，阻礙了間充質(zhì)干細胞的規(guī)?；苽渑囵B(yǎng)。因此，需要建立一套高效分離人臍帶間充質(zhì)干細胞的方法。

膠原酶和胰蛋白酶 - EDTA 消化法：收集的臍帶組織可通過膠原酶 type-I 和胰蛋白酶 - EDTA 消化進行間充質(zhì)干細胞的分離。將處理后的分離細胞沉淀接種在含有 DMEM Nutrient Mix F12、10% FBS 和 1% 抗生素抗真菌溶液的六孔板中，在 37°C、5% CO?的濕潤培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至 70 - 80% 融合度。然后使用 Neubauer 計數(shù)板在顯微鏡下通過臺盼藍染色進行細胞定量和活力評估。研究發(fā)現(xiàn)，胰蛋白酶消化兩種組織產(chǎn)生的細胞數(shù)量少于膠原酶處理，但胰蛋白酶處理提供的活細胞數(shù)量高于膠原酶處理。因此，胰蛋白酶 - EDTA 可用于分析研究，在這種情況下細胞產(chǎn)量的重要性較低。

二、小鼠臍帶和脂肪來源間充質(zhì)干細胞

組織采集：對于瑞士白化小鼠，臍帶間充質(zhì)干細胞從胎兒的臍帶收集，脂肪來源間充質(zhì)干細胞從小鼠的腹部脂肪組織收集。

分離方法：同樣采用膠原酶 type-I 和胰蛋白酶 - EDTA 消化從收集的組織中分離 AD-MSCs 和 UC-MSCs，分離后的細胞處理和培養(yǎng)方法與人臍帶間充質(zhì)干細胞類似。

三、奶牛脂肪間充質(zhì)干細胞

組織采集與消化：采集不同部位奶牛脂肪，選用 0.25％胰蛋白酶消化，并進行貼壁培養(yǎng)，獲取原代奶牛 AD-MSCs。

細胞形態(tài)與生長特征：通過傳代培養(yǎng)進一步純化擴增。顯微鏡觀察細胞形態(tài)及生長特征，兩種不同部位的 AD-MSCs 均呈長梭形、紡錘形或多角形貼壁生長，且兩個部位來源的 AD-MSCs 的生長曲線差異較小。

表面標(biāo)志物及分化能力：分離培養(yǎng)的 AD-MSCs 的表面標(biāo)志物 CD44 和 CD73 呈陽性表達，而 CD34 和 CD45 呈陰性表達。在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)試驗中呈現(xiàn)出較強的成脂和成骨分化能力。

四、人肺癌組織來源間充質(zhì)干細胞

分離方法：采用組織塊分離法分離人肺癌組織來源的間充質(zhì)干細胞。

細胞形態(tài)與生物學(xué)特征：所分離的細胞呈成纖維樣形態(tài)，并呈漩渦式生長；其 CD73、CD90、CD105 和 CD166 呈陽性表達，CD14、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR 均呈陰性表達，且具有向成骨細胞、脂肪細胞和成軟骨細胞分化的能力。

五、兔脂肪間充質(zhì)干細胞

組織采集與消化：體外分離兔腹股溝皮下脂肪組織，采用 0.1％I 型膠原酶消化，用含 10％胎牛血清的高糖完全培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)兔 ADSCs。

細胞特性分析：對其細胞形態(tài)、體外增殖能力、多向分化潛能及表面標(biāo)記進行分析。體外分離培養(yǎng)的兔 ADSCs 具有良好的細胞形態(tài)、極強的增殖能力，體外經(jīng)二向誘導(dǎo)，具有成脂及成骨分化潛能，兔第 2 代 ADSCs 表面標(biāo)記 CD34、CD105 陽性，Sca-1 高表達，幾乎不表達 CD45 及 SSEA-1。

六、人骨髓來源間充質(zhì)干細胞

分離方法：密度梯度離心從人骨髓分離單個核細胞，接種培養(yǎng) 3h 后頻繁換液，培養(yǎng)至第 14d 時用 0.25% 胰酶室溫作用 2min 移種后繼續(xù)培養(yǎng)至第 21d。

細胞鑒定：采用流式細胞術(shù)檢測收獲細胞的表型分子。收獲細胞在特定條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)至第 14d，分別采用茜素紅染色、甲苯胺藍染色和油紅染色進行鑒定。第 21d 時均一的長梭狀成纖維樣細胞鋪滿瓶底，它們高表達 CD105、CD73、CD90 并低表達 CD45、CD34 和 CD14，能夠被誘導(dǎo)分化為骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞。

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