標簽：免疫印跡 蛋白質(zhì) 科普 抗體  蛋白質(zhì)免疫印跡

    蛋白質(zhì)免疫印跡是檢測復雜混合物中蛋白質(zhì)抗原的常用技術。通過 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品，然后將分離的蛋白質(zhì)轉移到膜上。這些膜與特定于目標蛋白質(zhì)的抗體一起孵育，該抗體與固定在膜上的蛋白質(zhì)條帶結合。然后使用檢測系統(tǒng)對抗體進行可視化，該系統(tǒng)通常基于與 Ig 鏈結合的二級蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)與顯色反應相關。

與理論預測相反，檢測到幾個波段的情況并不少見。雖然抗體可能并不完全針對蛋白質(zhì)，但其他因素可能是原因：

1. 抗原的蛋白水解分解。

這種情況并不少見，特別是如果樣品儲存時間過長，或者在起始組織均質(zhì)化后分離蛋白質(zhì)或膜。所有附加條帶的表觀分子量均低于全長蛋白質(zhì)。特別易感的是突觸蛋白和突觸結合蛋白。應考慮添加蛋白酶抑制劑，如 PMSF、胃蛋白酶抑制劑或亮抑酶肽。 

2. 每條泳道蛋白質(zhì)過多或檢測系統(tǒng)過于敏感。

蛋白質(zhì)免疫印跡法中，凝膠過載是“鬼帶”的常見原因之一。固定的蛋白質(zhì)可以提供一個集中的吸附表面，某些 IgG 可以非特異性地結合到該表面。類似地，當使用高度靈敏的檢測系統(tǒng)（例如增強的化學發(fā)光）時，可能會發(fā)現(xiàn)這種非特異性結合。起始材料的一系列稀釋通常會澄清哪些信號是人為的。

3.低效阻塞。

實驗中會應用到多種不同的封閉劑，某些非離子去污劑或蛋白質(zhì)等封閉劑容易產(chǎn)生低效阻塞的影響。如果改變阻塞條件就可以解決此問題。

4. 抗原濃度過低。

SDS-PAGE 的分辨率一般限制在 50-100 個波段。如果抗原的相對濃度過低（小于總蛋白的 0.2%），則可能難以檢測（例如，突觸釋放蛋白/VAMP 與細胞勻漿中的組蛋白共遷移，干擾其檢測）。信號增強可能會導致人工帶的出現(xiàn)。因此可以適當考慮通過分級分離或免疫沉淀富集抗原。

蛋白質(zhì)免疫印跡技術中，以上所遇到的問題就是關于多條帶產(chǎn)生的常見問題。通過以上幾個方面進行分析驗證即可排除。 蘇州阿爾法生物十三年專注于生命科學領域實驗室設備及實驗室耗材和試劑供應領域，包括振蕩培養(yǎng)箱、生物反應器、移液器、離心機、顯微鏡等，集實驗室設計規(guī)劃、實驗室儀器設備、生物實驗器材供應、售后服務為一體，使您的實驗室采購更加方便快捷。 0512-62956104或 18934597460.

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