針對 Q2000C qPCR 設備光通道偏移的問題（如 ROX 模式下出現(xiàn)綠色光而非預期的黃色 / 橙色），結合設備特性和行業(yè)通用解決方案，以下是具體的排查步驟和建議：

一、硬件故障排查與處理

1. 光學系統(tǒng)校準

Q2000C 采用 SSLP?短光程靜態(tài)熒光 CCD 成像技術，其光學系統(tǒng)通過固定濾光片和 LED 光源實現(xiàn)多通道檢測。若出現(xiàn)光通道偏移，需重點檢查以下環(huán)節(jié)：

l 濾光片狀態(tài)：ROX 通道的濾光片（通常對應 570-600nm 波長）可能因長期使用或外力沖擊發(fā)生物理偏移。需聯(lián)系廠商工程師打開設備，檢查濾光片支架是否松動或移位。

l 光源老化：設備采用長壽命 LED 光源，若使用超過 5 年或頻繁高溫運行，可能導致發(fā)光波長漂移?？赏ㄟ^以下方法驗證：

l 光源自檢：進入設備軟件的 “系統(tǒng)設置” 或 “診斷” 菜單，執(zhí)行 LED 光源強度測試。若 ROX 通道的 LED 強度顯著低于其他通道，可能需更換光源模塊。

l 光譜驗證：使用光譜儀直接測量 ROX 通道的激發(fā) / 發(fā)射波長，確認是否與標稱值（如 570nm 激發(fā)，585nm 發(fā)射）一致。

2. 光路污染或遮擋

光路清潔：光學鏡片、CCD 探測器表面可能積累灰塵或冷凝水，導致信號衰減或顏色偏差。需用無塵布蘸取異丙醇輕輕擦拭光路組件（注意：非專業(yè)人員切勿自行拆卸）。

樣品臺遮擋：檢查樣品臺是否完全閉合，避免環(huán)境光干擾。若使用白色 PCR 管，需確認管蓋無劃痕或變形。

二、軟件與參數(shù)調整

1. 通道配置檢查

波長設置：進入設備軟件的 “通道管理” 界面，確認 ROX 通道的激發(fā) / 發(fā)射波長參數(shù)是否正確（通常為 570nm/585nm）。若參數(shù)被意外修改，需恢復默認值。

增益與偏移校準：

手動校準：使用標準熒光染料（如羅丹明 B）配制梯度濃度溶液，執(zhí)行 “光信號校準” 程序，調整通道增益和偏移值。

自動校準：部分型號支持 “自動增益控制”（AGC），可嘗試啟用該功能優(yōu)化信號強度。

2. ROX 校正設置

參比染料選擇：若 ROX 信號異常，可嘗試在軟件中將參比染料從 ROX 切換為 NONE，觀察熒光信號是否恢復正常。若切換后信號正常，可能是 ROX 染料濃度與儀器不匹配。

基線調整：在數(shù)據(jù)分析界面，手動調整基線范圍（如設置為 Ct 值 - 4），避免背景噪音干擾。

三、行業(yè)通用解決方案參考

1. 光信號校準流程

標準品準備：使用已知濃度的 ROX 染料（如 10nM）配制系列稀釋液（10nM、1nM、0.1nM）。

校準程序：

1) 在設備軟件中選擇 “校準” 模式，選擇 ROX 通道。

2) 依次加載不同濃度的 ROX 標準品，記錄熒光強度值。

3) 生成標準曲線，驗證線性范圍（理論斜率應為 1.0）。

4) 根據(jù)曲線調整通道增益，使信號強度與濃度呈線性關系。

2. 常見故障對比表

四、操作注意事項

l 環(huán)境控制：設備應放置在溫度穩(wěn)定（20-25℃）、無振動的環(huán)境中，避免頻繁開關機。

l 耗材兼容性：優(yōu)先使用朗基推薦的白色 PCR 管和光學封板膜，避免使用劣質耗材導致信號衰減。

l 定期維護：每季度執(zhí)行一次光路清潔和溫度校準，每年進行全面性能驗證（如溫度均勻性、熒光線性度）。

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