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蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司

16年專注生物實驗室儀器設(shè)備&耗材綜合供應(yīng)

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瓊脂糖凝膠電泳中的凝膠制備關(guān)鍵因素
信息摘要:
     對于一般的分析工作,特別是定量分析工作來講,人們強調(diào)制備的凝膠要有較好的可重復(fù)性。如果制備得到的凝膠本身沒有重復(fù)性,比如孔徑前后兩…

     對于一般的分析工作,特別是定量分析工作來講,人們強調(diào)制備的凝膠要有較好的可重復(fù)性。如果制備得到的凝膠本身沒有重復(fù)性,比如孔徑前后兩次凝膠相差頗大,那么在 這樣的條件下,所得到的分析結(jié)果,其可信性就有問題,往往會使幾次結(jié)果不能重復(fù)。所以,為了要獲得可靠的分析結(jié)果,在制膠時對能影響凝膠聚合的種種因素必須加以控制。

有哪些主要因素,又怎樣來控制它們的條件,分別簡述如下:

(1) 制備凝膠用的主要試劑

(a)丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺至少是分析純級的試劑。存放時間一般不超過1年, 如果存放時間過長,丙烯酰胺受潮水解,丙烯酸含量增多。若利用它為單體,聚合時孔徑很 不均一,表現(xiàn)現(xiàn)象是聚合時間延長,甚至很難聚合,這就必須重結(jié)晶。對于定量分析工作一 般都要求對單體進行重結(jié)晶。

丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺應(yīng)放在棕色瓶中,干燥,低溫( + 4C)條件下保存。丙烯酰 胺經(jīng)陽光照射,自身會聚合成長鏈,酰胺基也會縮合形成亞胺橋,從而影響交聯(lián)結(jié)果。

配制成的貯存液,也應(yīng)盛于棕色瓶中,于+ 4 C保存,時間不超過1個月。

預(yù)制膠使用

(b)TEMED應(yīng)密封置于冰箱中貯存,使用的量應(yīng)使凝膠能在30?60分鐘內(nèi)聚合完 成,如前述不再重復(fù)。

(c)過硫酸銨應(yīng)在臨用前配制。配制好的溶液應(yīng)在冰箱中存放,使用期不超過1星 期。存放1星期后的過硫酸銨,可能仍會起作用,但不適用來作精細的分析工作。

(2)溫度

必須保持聚合溫度的恒定。聚合速度與溫度有關(guān),一般是溫度高聚合快,而聚合的快 慢影響交聯(lián)孔徑的大小,所以,必須保持恒定溫度。通常都固定在與電泳相同的溫度。凝 膠的聚合反應(yīng)是一個放熱反應(yīng),所以必須有效地散熱。一般用薄壁玻璃管在流通空氣中進 行凝膠聚合,便能達到散熱的目的°

(3)氧氣

氧是凝膠鏈合成反應(yīng)的終止劑。所以,制膠前必須充分抽氣,使02降低到一定水平 以下或者充以惰性氣體,如氧氣來降低02的含量。

(4)光照

光照的時間和強度都和凝膠的聚合速度有關(guān)。因此,必須固定光源強度、光照距離和 光照時間。

注意和控制好以上幾點,制備得到的凝膠其可重復(fù)性的程度就高。



蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司成立于2008年,位于蘇州園區(qū)生物納米園(Biobay)A5幢301室。公司管理團隊專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年,擁有專業(yè)的技術(shù)團隊與完善的售后服務(wù)體系,目前已為300余家實驗室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù),涵蓋各大高校、檢測中心、科研機構(gòu)、制藥企業(yè)等13個群體。提供的實驗室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱,恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀,瑞寧移液器,生物反應(yīng)器,發(fā)酵罐,超低溫冰箱,液氮罐,高壓滅菌器,超純水機,天平,離心機,離心濃縮儀、研磨機、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱,梅特勒,樂楓,搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個余廠家。

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