細胞轉(zhuǎn)染是將外來核酸RNA或DNA 等小分子物質(zhì)轉(zhuǎn)移到健康細胞中以產(chǎn)生“轉(zhuǎn)基因細胞”的過程。 在轉(zhuǎn)染過程中，外源核酸鏈進入健康細胞后，核酸與細胞中現(xiàn)有的 DNA 結合，形成一個轉(zhuǎn)基因細胞。細胞轉(zhuǎn)染過程中如何提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染效率的影響因素有哪些。

細胞轉(zhuǎn)染的主要方法是什么？

細胞轉(zhuǎn)染主要分為兩大類，即：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染。

     穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是將外源核酸繞過細胞膜，進入細胞，并通過核膜傳遞從而使外源核酸與宿主 DNA（或 RNA）整合以產(chǎn)生修飾基因。這種轉(zhuǎn)染方式所培育的細胞后代都將整合這種修飾基因，主要應用領域為：藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等。

瞬時轉(zhuǎn)染是將外源核酸繞過細胞膜進入細胞，并且（如果是 DNA）通過核膜傳遞。與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別是：外源 DNA 不會整合到宿主 DNA 中，而是通過蛋白質(zhì)生產(chǎn)繼續(xù)表達自己。

      瞬時轉(zhuǎn)染方式的主要特點是：外源 DNA 不會傳遞給未來的細胞后代，所以環(huán)境因素改改變或細胞分裂產(chǎn)生都將終止表達。瞬時轉(zhuǎn)染有助于了解基因沉默、抑制性 RNA 和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)。

至于，實驗中選擇哪種轉(zhuǎn)染方法，其實主要取決于兩個因素：你的研究方向和正在使用的細胞區(qū)別。

細胞轉(zhuǎn)染過程：

細胞轉(zhuǎn)染按細胞轉(zhuǎn)染過程的不同可以分為以下幾種：

生物轉(zhuǎn)染：通常被稱為轉(zhuǎn)導，方法是通過病毒感染方式將 DNA 整合到宿主細胞核中進行復制。也是醫(yī)學研究的常用方法。

化學 轉(zhuǎn)染：化學轉(zhuǎn)染法是通過陽離子聚合物和脂質(zhì)體將核酸鏈帶入細胞。通過使細胞帶負電和聚合物帶正電，這兩者被吸引，最終核酸沉積在細胞中的細胞轉(zhuǎn)染方法。

物理轉(zhuǎn)染：物理轉(zhuǎn)染法是基于電流、激光的轉(zhuǎn)染方法。比如：通過電轉(zhuǎn)儀實現(xiàn)轉(zhuǎn)染或者通過光轉(zhuǎn)染的方式，使激光束會在特定的亞細胞位置產(chǎn)生孔洞，來傳遞外源核酸。

決定細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？

決定細胞轉(zhuǎn)染效率主要的幾個因素：

1. 細胞群的生長態(tài)勢與細胞活力：-在創(chuàng)建細胞分析的過程中，細胞活力往往具有決定性的作用。如果沒有健康的細胞群，那么轉(zhuǎn)染效率也相對低下，甚至還會得到不正確和誤導性的結果。

2.細胞融合度：細胞的融合度衡量細胞在給定表面上的堆積程度（不要與細胞密度混淆）。50% 的細胞匯合意味著一半的表面被覆蓋。融合過少或過多都會影響細胞對轉(zhuǎn)染的接受程度。

3.細胞類型：不同類型的細胞具有不同的壽命、細胞壁特征及功能。比如部分細胞容易進行轉(zhuǎn)染，而有些細胞則本身就難以轉(zhuǎn)染，所以轉(zhuǎn)染效率也會存在差異。

4.轉(zhuǎn)染的核酸類型：不同核酸的復雜程度也不相同。比如：DNA的結構 比 RNA 復雜，而 RNA 比某些單獨的核酸鏈更復雜。一般來說，核酸復雜的，轉(zhuǎn)染過程相對困難，轉(zhuǎn)染效率相應也較低。

5.轉(zhuǎn)染方法：使用不同的轉(zhuǎn)染方法，所獲得的細胞轉(zhuǎn)染效率也是不一樣的。

如何提高轉(zhuǎn)染效率

     在不同的轉(zhuǎn)染過程（生物、化學、物理）中，隨著技術和工藝不斷改進，轉(zhuǎn)染效率也在不斷提升。例如，光學技術和激光精度的每一次進步都會對光轉(zhuǎn)染產(chǎn)生有利的影響。

但在此之前，提高細胞轉(zhuǎn)染效率的方法主要有：

1. 培養(yǎng)健康的活力指數(shù)高的健康細胞群。細胞分選儀可以降低細胞分選時高電壓對細胞的刺激，是輔助培養(yǎng)健康細胞群的重要工具。

2. 優(yōu)化核酸，保證有效的核酸純度。 細胞轉(zhuǎn)染過程中需要確保所引入細胞的 DNA 和 RNA 盡可能接近同質(zhì)。否則，分析結果時變量太多，轉(zhuǎn)染效率會因不同類型的基因進入細胞而變得混亂。轉(zhuǎn)染前，可以制備不同濃度核酸來用于細胞檢測的測試。例如，通過逐步制備 25-250 ng 的核酸濃度以針對實驗的細胞群進行測試，從而篩選出合適的轉(zhuǎn)染濃度從而提升轉(zhuǎn)染效率。

3.實時校正每個孔的細胞群，使每個孔內(nèi)的細胞群盡量保持適宜的密度。

    當細胞大量聚集在一個孔中時，由于細胞接觸面會受到抑制，容易造成低轉(zhuǎn)染率。正常情況下，細胞的匯合度在大約 60-80%之間，轉(zhuǎn)染效率較高。

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