Cell Counting Kit-8，簡稱CCK-8試劑盒或CCK8試劑盒，是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還 原生成橙黃色的 formazan(參考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1. WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)

     WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比具有一定的優(yōu)點(diǎn)。因?yàn)镸TT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度高。
WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度較高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。
本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測。
   本試劑盒檢測比較便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進(jìn)行任何配制等操作。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測。
酚紅和血清對本試劑盒的測定無大影響。
WST-8對細(xì)胞幾乎無毒性。加入CCK-8溶液顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測時(shí)間更加靈活，便于找到合適的測定時(shí)間。
蘇州阿爾法生物還提供各種細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測試劑盒可以比較和選擇
本試劑盒可以測定500個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。
注意事項(xiàng)：
由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。用酶標(biāo)儀檢測前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。

使用說明：
1. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。
3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時(shí)，對于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4. 在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片?？梢允褂么笥?00nm的波長，例如650nm，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
5. 將不同數(shù)量的HeLa細(xì)胞按照每孔100微升培養(yǎng)液接種到96孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁充分后，每孔加入10微升的CCK-8溶液孵育2小時(shí)后測定A450的檢測效果圖參考圖2。檢測效果僅供參考，實(shí)測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異。

圖2. CCK-8試劑盒測定不同數(shù)量HeLa細(xì)胞的檢測效果圖。實(shí)測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

常見問題：
1. CCK-8溶液對細(xì)胞的毒性大小如何？
CCK-8溶液對細(xì)胞的毒性非常低，通常觀察不到細(xì)胞毒性。細(xì)胞在CCK-8法檢測后仍然可以正常生長，并可以用于其它的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。但為了避免CCK-8溶液可能帶來的對于后續(xù)檢測的影響，除非該細(xì)胞極難獲得，否則不推薦把CCK-8溶液孵育過的細(xì)胞用于其它實(shí)驗(yàn)。
2. 如果吸光度值太低，可以采取什么辦法？
a. 適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量。
b. 延長加入CCK-8試劑后的孵育時(shí)間。
相關(guān)產(chǎn)品：