16年專注生物實驗室儀器設(shè)備&耗材綜合供應(yīng)
0512-6295610418934597460
0512-6295610418934597460
熱門關(guān)鍵詞： CO2搖床 凝膠成像系統(tǒng) 細胞培養(yǎng)耗材 乳酸分析儀 發(fā)酵罐 Rainin移液槍 振蕩培養(yǎng)箱 生物反應(yīng)器
0512-62956104
抗體表達細胞株構(gòu)建服務(wù)
基于CHO
細胞的抗體表達
抗體廣泛存在于生物醫(yī)學研究、創(chuàng)新藥發(fā)展中， 且需求量大。然而， 滿足國際市場日益增長的抗體需求量是一個巨大的挑戰(zhàn)。為了維持抗體的供求平衡， 科學家們發(fā)明了更好的方法來優(yōu)化抗體的表達， 以達到增加抗體的單體積表達量并減少生產(chǎn)成本。由于新的克隆方法、基因改造技術(shù)以及一系列的細胞和載體工程技術(shù)， 加上發(fā)酵技術(shù)上的改進， 這些都使抗體表達得益較大。
哺乳動物細胞是抗體藥物產(chǎn)品使用的主要表達系統(tǒng)， 主要包括Sp2/0骨髓瘤細胞、 NS0小鼠骨髓瘤細胞、 HEK293人胚胎腎細胞和CHO中國倉鼠細胞， 其中以CHO系應(yīng)用較廣泛。
| 基于CHO細胞的抗體表達系統(tǒng)簡介
CHO細胞譜系
細胞株開發(fā)常用的CHO細胞：DG44, DUXB11, CHO-S, CHO-K1 WT, CHO-K1 GS-/-
|
|
篩選標記
|
篩選試劑
|
|
代謝型篩選標記
(擴增型基因篩選標記)
|
二氫葉酸還原酶（DHFR）
|
甲氨蝶呤 (MTX)
|
|
谷氨酰胺合成酶（GS）
|
氨基亞砜蛋氨酸 (MSX)
|
|
|
抗生素篩選標記
(非擴增型基因篩選標記)
|
嘌呤霉素搞性（Puromycin acetyltransferase）
|
嘌呤霉素 (Puromycin)
|
|
殺稻瘟脫氫酶（Blasticidin deaminase）
|
殺稻瘟霉素 (Blasticidin)
|
|
|
組氨醇脫氫酶（Histidinol dehydrogenase）
|
組氨醇 (Histidinol)
|
|
|
潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hygromycin phosphotransferase)
|
潮霉素 (Hygromycin)
|
|
|
氯林可霉素而藥基因（Zeocin resistance gene）
|
氯林可霉素 (Zeocin)
|
|
|
博來霉素耐藥基因（Bleomycin resistance gene）
|
博來霉素 (Bleomycin)
|
|
|
氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（Aminoglycoside phosphotransferase）
|
新霉素 (Neomycin or G418)
|
CHO細胞的優(yōu)點
1. CHO細胞遺傳背景清晰， 不易傳播人類病毒， 具有很高的安全性， 以CHO作為宿主細胞表達生物蛋白質(zhì)， 容易被藥物審核機構(gòu)， 如FDA審批通過
2. CHO細胞可以通過懸浮馴化 適應(yīng)無血清懸浮培養(yǎng)， 并能夠?qū)崿F(xiàn)在無血清培養(yǎng)基中快速及高密度生長，這為藥物的質(zhì)量控制和大規(guī)模生產(chǎn)帶來極大的便利和實惠；
3. CHO細胞表達的重組蛋白質(zhì)能夠獲得 類似于人源蛋白質(zhì)的翻譯后修飾， 如翻譯后的糖基化修飾、
唾液酸化修飾等， 生產(chǎn)的蛋白質(zhì)較其它表達系統(tǒng)更加與人體天然的生物蛋白質(zhì)相似第四， 較少分泌內(nèi)源性蛋白， 降低純化難度；
4. CHO細胞已經(jīng)開發(fā)出了多種商業(yè)化高效高表達系統(tǒng)， 如二氫葉酸還原酶篩選體系、 谷氨酰胺合成酶篩選體系和遺傳霉素篩選體系等。
CHO細胞的異質(zhì)性特征
CHO細胞在長期傳代過程中存在的穩(wěn)定性表達問題， 主要體現(xiàn)在：
1. CHO 細胞遺傳不穩(wěn)定性引起的表達不穩(wěn)定
CHO 細胞系基因組本身具有不穩(wěn)定性。通常， 中國倉鼠體細胞的染色體為 11 對22 條， 而中國倉鼠卵巢細胞的染色體則發(fā)生了大面積不穩(wěn)定重排重組現(xiàn)象， 不同細胞系染色體的數(shù)目也不恒定。基因組的不穩(wěn)定性， 主要表現(xiàn)在其染色體層面上的拷貝數(shù)變異。
2. 外源基因隨機整合引起的表達不穩(wěn)定
傳統(tǒng)方法主要是通過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后， 利用壓力篩選從而獲得目的蛋白質(zhì)表達細胞株。因此， 外源基因都是通過隨機整合方式， 整合到CHO 基因組內(nèi)。由于整合位點的不確定性， 可能在細胞培養(yǎng)后期引起表達不穩(wěn)定。
中國倉鼠卵巢細胞擁有22 條染色體， 其中10 對常染色體及2 條性染色體。而CHO-K1 細胞系則顯示出與其有極大的不同，其僅有8 條染色體顯示出同普通中國倉鼠染色體相同， 而13個染色體則以“Z” 標志， 因其中包含著染色體重排、 缺失、移位等現(xiàn)象。
| 抗體表達CHO細胞株的構(gòu)建策略與流程
1. 細胞內(nèi)的蛋白表達過程
轉(zhuǎn)錄 → mRNA加工 → 翻譯 → 翻譯后折疊與修飾 → 細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運 → 分泌
2. 抗體表達CHO細胞株的構(gòu)建策略
Representation of different steps involved in building an efficient system for protein expression
3. 重組蛋白表達工程細胞株的構(gòu)建流程圖
載體構(gòu)建 → 轉(zhuǎn)染 → 細胞池(pool) 篩選 → 單克隆化篩選 → 批次補料培養(yǎng)篩選 → 蛋白質(zhì)量篩選 → 細胞株最終選定與建庫 → 細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)與生產(chǎn)
我們還能為您提供：
基因敲除細胞系服務(wù)
基因點突變細胞系服務(wù)
基因定點敲入細胞系服務(wù)
基因敲除Cell Pool服務(wù)
當您來到這個頁面時，您已成為我們最尊貴的客戶，蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司真誠歡迎您的到來！
0512-62956104
十四年專注于生物實驗室儀器供應(yīng)
全國服務(wù)熱線
公眾號
移動端
服務(wù)熱線0512-6295610418934597460
蘇州工業(yè)園區(qū)星湖街218號生物納米園A5樓301室
haiyan_shao@bioalpha.cn
蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司?版權(quán)所有備案號：蘇ICP備20036540號 實驗室設(shè)備采購平臺一站式供應(yīng)平臺
