天根-瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(增強(qiáng)型)(離心柱型) DP 219使用說明【點(diǎn)擊進(jìn)入下載中心】

儲(chǔ)存條件

該 試 劑 盒 所 有 組 分 置 于 室 溫 ( 1 5 - 3 0 ℃ ) 干 燥 條 件 下 ， 可 保 存 1 2 個(gè) 月 。 若 溶 液 產(chǎn) 生 沉

淀 ， 使 用 前 可 在 3 7 ℃ 水 浴 中 預(yù) 熱 1 0 m i n 以 溶 解 沉 淀 ， 不 影 響 效 果 。

注意事項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。  

1. 電泳時(shí)請(qǐng)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。

2. 如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用TAE電泳緩沖液。

3. 所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

4. 切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。

5. 如果回收率較低，可在膠充分溶解后檢測(cè)pH值，如pH值大于7.5,可向含有DNA的膠溶 液中加10-30μl3 M醋酸鈉(pH5.2)將pH值調(diào)到5-7之間。

6. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。 

操 作 步 驟

使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。

1. 將單 一 的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分)放入干凈的離心管

中，稱取重量。

注意：使用切膠器(OSE-GC)切膠時(shí)，切膠器口對(duì)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠中的DNA條帶下壓切割。切膠完成后，推動(dòng)中心桿，將膠塊推入干凈的離心管中。根據(jù)凝膠膠孔寬度可進(jìn)行單次切割和連續(xù)切割。

2. 向膠塊中加入3倍體積溶膠液PE(如果凝膠重為0.1 g,其體積可視為100 μl,則加入300 μ溶膠液PE。使用切膠器切割1%的瓊脂糖凝膠，單塊重量約為0.06 g,實(shí)際膠塊重量與 凝膠濃度及厚度相關(guān)),室溫15-25℃溶膠5-10 min,其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，

以確保膠塊充分溶解。 若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊)。  

注意：對(duì)于大于5 kb以上的大片段或者是膠濃度大于1.5%的情況下，建議50℃加熱溶膠 5-10 min;膠塊完全溶解后最好將溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)。

3. 將上 一 步所得溶液加入 一個(gè)吸附柱CA5中(吸附柱放入收集管中),室溫放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g )離心30-60 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CA5放入收集

管中。

注意：吸附柱容積為800 μl,若樣品體積大于800 μl可分批加入。

4. 向吸附柱CA5中加入600 μl漂洗液PW 使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),  12,000

rpm(~13,400×g)離心30-60 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CA5放入收集管中。

注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW加入后靜置2-5 min再離心。

5. 重復(fù)操作步驟4。

6. 將吸附柱CA5放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g )離心2 min,盡量除盡漂洗液。 將吸附柱CA5置于室溫放置數(shù)分鐘，徹底地晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實(shí) 驗(yàn) 。

注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。