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細(xì)胞凋亡檢測(cè)-細(xì)胞周期檢測(cè)-細(xì)胞檢測(cè)服務(wù)

細(xì)胞檢測(cè)服務(wù)包括使用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行的細(xì)胞表面標(biāo)記檢測(cè)服務(wù)；細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)；細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)等

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1. 細(xì)胞表面標(biāo)記檢測(cè)服務(wù)

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）已廣泛地應(yīng)用于基礎(chǔ)研究，并逐步進(jìn)入臨床檢測(cè)，用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞。細(xì)胞表面標(biāo)記主要包括表面受體和表面抗原，對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記的檢測(cè)已廣泛用于基礎(chǔ)、臨床免疫學(xué)研究和患者免疫功能的測(cè)定，如對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記檢測(cè)。

2006年國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)（ISCT）規(guī)定了間充質(zhì)干細(xì)胞的低鑒定標(biāo)準(zhǔn)：
基本條件下貼壁生長(zhǎng)
表達(dá)CD105、CD73、CD90，

不表達(dá)CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/ CD19、HLA-DR；
體外可以誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞。
采用細(xì)胞表面標(biāo)記抗體試劑盒對(duì)不同的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行流式鑒定。

細(xì)胞檢測(cè)服務(wù)

圖1 Human MSC檢測(cè)指標(biāo)分別有CD105（+）、CD29（+）、CD73（+）、CD34（-）、CD45（-）、CD11b（-）、CD44（+）

2. 細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。通常使用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒，如常見(jiàn)的Annexin V熒光雙染法，其檢測(cè)原理為：Annexin V/ Annexin A5為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細(xì)胞漿膜的內(nèi)層，但在凋亡早期，膜不對(duì)稱性喪失，PS易位至細(xì)胞表面。熒光標(biāo)記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合，表明該細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。

細(xì)胞凋亡檢測(cè)效果

圖2 活細(xì)胞比例約88.14%，凋亡早期細(xì)胞約1.68%，
凋亡晚期或壞死細(xì)胞約2.66%，裸核細(xì)胞約7.53%

3. 細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)
碘化丙啶(Propidium，簡(jiǎn)稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過(guò)程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。

細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)

圖3 細(xì)胞周期擬合圖

Cas9X擁有自有流式檢測(cè)和流式分析分選平臺(tái)，

可以為膜蛋白基因敲除的客戶提供膜蛋白流式檢測(cè)和細(xì)胞分選富集服務(wù)。

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