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細胞凋亡檢測-細胞周期檢測-細胞檢測服務

細胞檢測服務包括使用流式細胞檢測技術(shù)進行的細胞表面標記檢測服務；細胞凋亡檢測服務；細胞周期檢測服務等

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1. 細胞表面標記檢測服務

流式細胞術(shù)（FCM）已廣泛地應用于基礎研究，并逐步進入臨床檢測，用流式細胞儀對細胞表面的抗原成分進行標記分析，可區(qū)別多種細胞。細胞表面標記主要包括表面受體和表面抗原，對細胞表面標記的檢測已廣泛用于基礎、臨床免疫學研究和患者免疫功能的測定，如對間充質(zhì)干細胞表面標記檢測。

2006年國際細胞治療協(xié)會（ISCT）規(guī)定了間充質(zhì)干細胞的低鑒定標準：
基本條件下貼壁生長
表達CD105、CD73、CD90，

不表達CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/ CD19、HLA-DR；
體外可以誘導分化為成骨細胞、脂肪細胞、成軟骨細胞。
采用細胞表面標記抗體試劑盒對不同的間充質(zhì)干細胞進行流式鑒定。

細胞檢測服務

圖1 Human MSC檢測指標分別有CD105（+）、CD29（+）、CD73（+）、CD34（-）、CD45（-）、CD11b（-）、CD44（+）

2. 細胞凋亡檢測服務
細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。通常使用細胞凋亡檢測試劑盒，如常見的Annexin V熒光雙染法，其檢測原理為：Annexin V/ Annexin A5為胞內(nèi)蛋白膜聯(lián)蛋白家族成員，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合。PS存在于正常細胞漿膜的內(nèi)層，但在凋亡早期，膜不對稱性喪失，PS易位至細胞表面。熒光標記的 Annexin V可與之特異性結(jié)合，表明該細胞為早期凋亡細胞。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現(xiàn)紅色熒光。

細胞凋亡檢測效果

圖2 活細胞比例約88.14%，凋亡早期細胞約1.68%，
凋亡晚期或壞死細胞約2.66%，裸核細胞約7.53%

3. 細胞周期檢測服務
碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。

細胞周期檢測服務

圖3 細胞周期擬合圖

Cas9X擁有自有流式檢測和流式分析分選平臺，

可以為膜蛋白基因敲除的客戶提供膜蛋白流式檢測和細胞分選富集服務。

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