流式細(xì)胞儀是一種用于細(xì)胞分析的實(shí)驗(yàn)室儀器，它能夠?qū)蝹€(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速而精確的定量和質(zhì)量分析。它主要通過將細(xì)胞懸浮液注入到儀器中，利用激光器照射細(xì)胞并檢測(cè)經(jīng)過細(xì)胞的光線散射和熒光信號(hào)，從而獲取大量有關(guān)細(xì)胞形態(tài)、大小、復(fù)雜度、表面標(biāo)記以及內(nèi)部分子的信息。它可同時(shí)測(cè)量多個(gè)參數(shù)，并具備高通量性能，能夠快速分析數(shù)以萬(wàn)計(jì)的細(xì)胞，并提供詳細(xì)的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)。它廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)、腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的研究和實(shí)驗(yàn)中。

    然而，在分析流式細(xì)胞儀得到的熒光結(jié)果時(shí)，常常會(huì)遇到一些問題，如信號(hào)強(qiáng)度弱、背景高、細(xì)胞群分布異常等。本文將介紹常見問題，并提供相應(yīng)的解決方法。

一、信號(hào)強(qiáng)度弱

1. 信號(hào)補(bǔ)償不正確：檢查流式細(xì)胞儀上的單色陽(yáng)性對(duì)照是否設(shè)置正確，并確保門控和補(bǔ)償設(shè)置正確。

2. 用于檢測(cè)的抗體不足：增加抗體的量或濃度。

二、熒光強(qiáng)度高

1. 抗體濃度過高：減少每個(gè)樣本中添加的抗體量。

2. 過量抗體被捕獲：洗滌步驟要充分，并在洗滌緩沖液中加入吐溫或Triton，以保持細(xì)胞的透化作用。

3. 封閉不足：在抗體混合液中加入1%-3%的封閉劑，并增加封閉步驟。

三、背景高/陽(yáng)性細(xì)胞百分比高

1. 增益設(shè)置過高/補(bǔ)償過低：使用陽(yáng)性對(duì)照正確設(shè)置流式細(xì)胞儀，并使用補(bǔ)償減少小顆粒背景信號(hào)和降低增益。

2. 抗體過量：降低抗體的濃度，并在洗滌緩沖液中加入去污劑，確保洗去過量的抗體。

四、在應(yīng)該只有一個(gè)細(xì)胞群的情況下觀察到兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞群

1. 表達(dá)靶蛋白的細(xì)胞群不止一個(gè)：檢查樣本中包含的細(xì)胞類型預(yù)期的蛋白表達(dá)水平，并確保細(xì)胞充分分離。

2. 出現(xiàn)細(xì)胞雙峰：細(xì)胞雙峰顯示為第二大細(xì)胞群，其熒光強(qiáng)度大約是單細(xì)胞熒光強(qiáng)度的兩倍。在染色前用移液槍將細(xì)胞輕柔混勻，并在細(xì)胞儀中運(yùn)行之前再次混勻。

五、側(cè)向散射背景偏高（來自小顆粒）

1. 細(xì)胞裂解：確保樣本中的細(xì)胞沒有裂解和破碎，樣本應(yīng)新鮮并正確制備，避免高速離心或激烈渦旋的操作。

2. 細(xì)菌污染：確保樣本不受細(xì)菌污染，細(xì)菌會(huì)自動(dòng)發(fā)出較弱的熒光，導(dǎo)致高事件率。

六、低事件率

1. 每毫升的細(xì)胞數(shù)過少：將細(xì)胞稀釋至1×105至1×106個(gè)細(xì)胞/mL，確保細(xì)胞均勻混合。

2. 細(xì)胞聚集阻塞管道：在染色前輕柔吹打幾次，確保得到同源單細(xì)胞懸液，也可以篩選或過濾細(xì)胞，去除團(tuán)塊。

七、高事件率

1. 細(xì)胞數(shù)量過多：稀釋樣本至1×105至1×106個(gè)細(xì)胞/mL。

   通過以上問題及解決方法，我們可以更好地分析流式細(xì)胞儀得到的熒光結(jié)果。然而，需要注意的是，不同實(shí)驗(yàn)條件可能會(huì)導(dǎo)致不同的問題和解決方法。因此，根據(jù)實(shí)際情況，選擇合適的解決方案是很重要的。同時(shí)，定期檢查和維護(hù)流式細(xì)胞儀，以確保其正常運(yùn)行，也是避免問題發(fā)生的重要措施。     

      蘇州阿爾法生物提供的進(jìn)口 GuavaregMuereg細(xì)胞分析儀， ImageStream?X MkII成像 流式細(xì)胞分析儀是將流式 細(xì)胞儀的高檢測(cè)速度、高靈敏度以及表型分析能力與顯微鏡的高分辨圖像及功能性研究完美結(jié)合。ImageStreamX MkII系統(tǒng)屬于臺(tái)式多色成像 流式 細(xì)胞儀，可采集多達(dá)12個(gè)通道的細(xì)胞圖像。

蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司成立于2008年，位于蘇州園區(qū)生物納米園（Biobay）A5幢301室。公司管理團(tuán)隊(duì)專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)與完善的售后服務(wù)體系，目前已為300余家實(shí)驗(yàn)室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)，涵蓋各大高校、檢測(cè)中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個(gè)群體。提供的實(shí)驗(yàn)室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀，瑞寧移液器，生物反應(yīng)器，發(fā)酵罐，超低溫冰箱，液氮罐，高壓滅菌器，超純水機(jī)，天平，離心機(jī)，離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱，梅特勒，樂楓，搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個(gè)余廠家。